液相色譜儀對于多數人來說都是很好上手的儀器了，但是就算是用過幾年、經驗豐富的分析員都會習慣于一些錯誤的操作(師傅教錯了?)，經常導致一些儀器故障。方便快捷的分析過程固然重要，但是為了多做樣品而忽略了一些*的步驟，往往得不償失，哪些操作不能做呢?下面就讓我們一起來了解一下吧。
 

　　1、流動相不過濾
 

　　因為塵埃或其它任何雜質微粒都會磨損柱塞、密封環、缸體和單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相好在玻璃容器內蒸餾，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜(0.2μm或0.45μm)等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒(或片)。輸液泵的濾器應經常清洗或更換。
 

　　2、使用后沒有及時清洗泵
 

　　流動相不應含有任何腐蝕性物質，含有緩沖液的流動相不應保留在泵內，尤其是在停泵過夜或更長時間的情況下。如果將含緩沖液的流動相留在泵內，由于蒸發或泄漏，甚至只是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環和柱塞等。
 

　　因此，必須泵入純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護的溶劑(對于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水)。
 

　　3、流動相走空
 

　　泵工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完，否則空泵運轉也會磨損柱塞、缸體或密封環，終產生漏液。
 

　　4、沒有流動相流出，又無壓力指示怎么辦?
 

　　可能是泵內有大量氣體，這時可打開泄壓閥，使泵在較大流量(如5ml/min)下運轉，將氣泡排盡，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環磨損，需更換。
 

　　5、壓力和流量不穩了?
 

　　原因可能是氣泡，需要排除;或者是單向閥內有異物，可卸下單向閥，浸入丙酮內超聲清洗。有時可能是砂濾棒內有氣泡，或被鹽的微細晶粒或滋生的微生物部分堵塞，這時，可卸下砂濾棒浸入流動相內超聲除氣泡，或將砂濾棒浸入稀酸(如4mol/L硝酸)內迅速除去微生物，或將鹽溶解，再立即清洗。
 

　　6、壓力為啥過高或過低?
 

　　可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應逐段進行。
 

　　在進行梯度洗脫時，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視:
 

　　PS:(在液相色譜中對組分復雜的樣品采用梯度洗脫的方法。在同一個分析周期中，按一定程序不斷改變流動相的濃度配比，稱為梯度洗脫。從而可以使一個復雜樣品中的性質差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達到良好的分離目的。
 

　　梯度洗脫的優點:1.縮短分析周期;2.提高分離能力;3.峰型得到改善，很少拖尾;4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。)